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    EZH2和PTEN 在肾透明细胞癌中的表达及临床研究

    发布时间:2020-05-28 来源:https://www.boshuolunwen123.com  作者:博硕论文辅导网

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    EZH2和PTEN 在肾透明细胞癌中的表达及临床研究

    摘要: 目的: 研究果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancerofzestehomolog 2, EZH2)和双特异磷酸酶活性的磷酸脂酶基因 ( PTEN) 在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义。方法: 采用免疫组织化学法对40 例肾脏透明细胞癌,22例癌旁标本及12例正常肾组织中EZH2及 PTEN的表达水平进行检测。结果: 与癌旁及正常肾组织相比, EZH2在肾透明细胞癌中的阳性表达率明显增高( P<0.05);且其表达水平随肾透明细胞癌临床分期的升高而增加( P<0.05), 但 EZH2的表达水平与肾透明细胞癌的病理分级无统计学差异( P>0.05) ; PTEN在肾透明细胞癌中的阳性表达率明显减低( P<0.05) ;  PTEN 的表达水平随肾癌的病理分级及临床分期的升高而减低(( P<0.05); 两因子的表达水平呈显著负相关( r= -0.545,P<0.05 ) 。结论: EZH2和 PTEN在肾透明细胞癌中表达异常,提示两者可能在肾透明细胞癌的发生发展中起重要的作用,两者联合检测有望成为肾透明细胞癌早期诊断及判断预后的辅助指标。
    关键词: 肾透明细胞癌; EZH2 ; PTEN; 免疫组化


    Expression and clinical significance of EZH2 and PTEN in renal clear cell carcinoma

    Abstract: Objective: To study the expression and the clinical significance of the enhancer of zeste homolog 2 (EZH2) and phosphate dual specificity phosphataseactivity of the lipase gene(PTEN)in renal clear cell carcinoma(RCCC). Methods: The expression level of EZH2 and PTEN were detected in the patients with  RCCC(40), pericancerous tissues(22) and normal renal tissues(12) by immunohistochemical method. Results: Compared with the paracancerous and normal renal tissue, the positive expression of EZH2 in RCCC was significantly increased( P<0.05) . The expression of EZH2 increased With the increase of the the clinical staging of the RCCC(P<0.05), but there is no statistical significance in the expression of EZH2 in different pathological grading of the RCCC (P>0.05) .The positive expression of PTEN in RCCC was significantly reduced (P<0.05); The expression of PTEN decreased whith the increase of the clinical stages and the pathological staging of the RCCC (P<0.05); The expression level of the EZH2 and PTEN had a significant negative correlation (r=-0.545, P<0.05). Conclusion: The abnormal expression of EZH2 and PTEN in RCCC indicate that they may play an important role in the development of the RCCC. The joint detection of the EZH2 and PTEN can be used as a indicator in diagnosis and prognosis of  the RCCC.
    Keywords: renal clear cell carcinoma; EZH2 ; PTEN;immunohistochemistry
         肾癌是来源于肾小管上皮细胞的泌尿生殖系统的恶性肿瘤之一,占全身恶性肿瘤的2%~3%,其最常见的病理类型是肾透明细胞癌(renal clear cell carinoma,RCCC),占80%~89%[1]。近年来其全世界的发生率呈增高和年轻化的趋势[2]。RCCC起病隐匿,早期症状不明显,发现较晚,病情发展快,大部分患者的预后欠佳,对患者的身体健康是极大的危害。目前该病的发生发展的机制尚不十分明确,与多种基因相关。为探讨果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2, EZH2)和双特异磷酸酶活性的磷酸脂酶基因( phosphate dual specificity phosphataseactivity of the lipase gene, PTEN)在肾透明细胞癌发生和发展中的作用,本研究通过免疫组织化学法检测了肾透明细胞癌,肾癌旁组织中以及正常肾组织中EZH2 和 PTEN的表达水平,探讨两者在RCCC中的临床意义。

    1 材料与方法
    1.1 标本的选取 标本均为   ?自己填 医科大学附属医院泌尿外科2007年3月- 2014 年3月行根治性手术切除肾透明细胞癌组织标本40例, 其中男22 例, 女 18例,年龄 30-74岁,平均 53.6岁。同时分别取距离肿瘤外缘2.0cm 处的癌旁组织和正常肾皮质组织为对照。所有标本均是通过根治性手术切除获得,术前都未有化疗或者放疗,均病理确诊为RCCC。
    1.2检测方法 免疫组化采用MaxVison法对EZH2和PTEN进行检测,严格按照试剂盒说明书进行具体操作。添加一抗(EZH2,PTEN 购自武汉博士德有限公司) 4℃下过夜,漂洗后加入二抗、DBA染色。苏木精复染,脱水,封片。阳性对照采用试剂公司提供的已知阳性标本,阴性对照采用PBS代替一抗。
    1.3结果判定 
    在细胞核内出现棕褐色、棕黄色、黄色的颗粒为EZH2的阳性表达。以细胞质内出现棕褐色、棕黄色、黄色的颗粒为PTEN的阳性表达。对免疫组化切片在400倍高倍镜视野5个视野中1000个细胞的阳性染色细胞数以及综合判定染色强度。
    1.4统计学方法 采用SPSS18.0统计软件进行分析。采用 X2 对两个样本率进行比较,采用Spearman等级相关分析两变量之间的相关性。P<0.05为差异有统计学意义。

    2 结果  
    2. 1 EZH2蛋白在 RCCC 中的表达 
       EZH2在肾癌组织中的阳性表达率为67.5%,而在癌旁组织和正常肾组织中表达逐渐减低,分别为9%和3.35%。EZH2在癌组织中的阳性表达率与癌旁及正常组织比较均有显著性差异( X2=21.37,P<0.05) ,结果见表1。    
                      表1 EZH2在肾透明细胞癌中的表达
       
        组别        n        阳性           阴性          X2    P   

        正常组织   12        1(3.35%)     11(96.65%)  
        癌旁组织   22        2 (9.0%  )   20 (91%)   21.37   <0.05
        癌组织     40        27(67.5 %)    13(32.5% )


    2.2  PTEN 蛋白在 RCCC 中的表达 
     PTEN在肾癌组织中的阳性表达率为37.5%,而在癌旁组织和正常肾组织中表达逐渐增高,分别为91%和100%。PTEN在癌组织中的阳性表达率与癌旁及正常组织比较均有显著性差异( X2=22.45 ,P<0.05) ,结果见表2。
                     
                      表2 PTEN 在肾透明细胞癌中的表达
       
        组别        n          阳性         阴性       X2      P   

        正常组织   12         12(100%)   0(0.0)  
        癌旁组织   22         20 (91%)   2(9%)   22.45   <0.05
        癌组织     40         15(37.5% ) 25(62.5% )

     

    2. 3  EZH2与PTEN 蛋白在 RCCC 中的表达与临床病理之间的关系   
        EZH2 在肾透明细胞癌中的的表达水平临床分期的增高而增加(P<0.05),但EZH2的表达水平 与肾透明细胞癌的病理分化无相关性(P>0.05)。PTEN 在肾透明细胞癌中的的表达水平随肾透明细胞癌的病理分化和临床分期的增高而减低(P<0.05),结果见表3。
             表3  EZH2与PTEN在肾透明细胞癌中的表达与临床病理的关系 
       
    临床病例特征       n      EZH2       P值       PTEN        P值   
                            ++     +/-            ++       +/-

     病理分化                             0.056                   0.013
       高分化         20    5      14            11        9    
       中分化         15    7      8             4        11
       低分化或未分化 5     1      4             1        4   
       临床分期                           0.03                     0.02
       TNM I-II期     21   12      9              13        8
       TNMIII-IV期   19   15      4               3        21

    2. 4  EZH2与PTEN蛋白在 RCCC 中表达的相关性 
        经Spearman等级相关分析显示,EZH2与PTEN在肾透明细胞癌中的表达呈显著性负相关,X2=13.573,  P =0.003。相关系数 r= -0.545, P = 0.002 。


    3. 讨论:
       肾癌是肾脏最常见的恶性肿瘤,近年来其发病率呈增长趋势。肾透明细胞癌是肾癌的主要病理类型。其治疗的主要方法为手术根治性切除,化疗和放疗的效果欠佳。目前引起肾透明细胞癌发生发展的分子学机制尚不十分明确。
       EZH2基因是1996年发现的定位于人染色体7q35位置上的一种基因。EZH2对染色质结构中的靶基因起抑制作用,促进细胞的增殖,其高表达水平对肿瘤细胞的扩散起刺激作用, 在肾母细胞瘤等多种肿瘤中明显高表达[3-5],但关于肾透明细胞癌的研究不多。EZH2作为一种转录阻遏因子,对组蛋白组蛋白去乙酰化酶、甲基转移酶的活性具有调控作用,对组蛋白的甲基化起介导作用、减少转录因子与DNA结合,使肿瘤靶基因的表达受到抑制。但家凤等[6]的研究对肾透明细胞癌及正常肾脏组织采用免疫组织化学法对EZH2蛋白进行检测,结果显示EZH2蛋白在肾透明细胞癌的表达水平显著高于正常肾脏组织。本研究采用免疫组织化学方法检测40例肾透明细胞癌组织中EZH2的表达情况,结果显示与正常肾组织以及癌旁组织相比,肾透明细胞癌的蛋白表达明显增高,与上述研究结果一致,表明 EZH2有可能是肾透明细胞癌一个敏感的生物学指标。本研究同时发现EZH的表达水平与肾透明细胞癌的病理分化和临床分期具有密切相关性。EZH2的阳性表达率与肾透明细胞的病理分级无统计学差异,但EZH2的阳性表达率随肾透明细胞癌临床分期的升高而增加,与Wagener的的研究结果相似[7],提示EZH2可能在肾透明细胞癌的进展中起非常重要的作用。
       PTEN定位于人类染色体的10q23,含有9个外显子,全长200kb,主要是存在于细胞质中,呈网络状分布,在胎盘、脑、肺、心脏和肝等组织中可检测到较高的表达水平。目前研究结果显示在胶质母细胞瘤、前列腺癌等多种原位肿瘤都与 PTEN 的突变和丢失相关。PTEN是一种具有脂质磷酸酶与蛋白磷酸酶两种活性的抑癌基因,其参与了肿瘤细胞周期、凋亡以及生长、侵袭转移等过程的调节。PTEN主要通过以下三种途径发挥作用:(1)三磷酸酰肌醇激酶途径(P13K-AKT途径);(2)局部黏附性激酶途径(FAK途径);(3)有丝分裂原激活的蛋白激酶途径(MAPK途径)。但是PTEN作用的具体机制目前尚不十分明确。Lee等研究[8]发现,PTEN通过抑制肿瘤细胞的增殖而对肾细胞癌的生长起到抑制作用,并且PTEN表达的缺失与患者的预后有密切关系。本研究采用免疫组织化学方法检测了40 例肾透明细胞癌组织中PTEN的表达情况,结果显示与正常肾组织以及癌旁组织相比,肾透明细胞癌的蛋白表达明显减低,与有关研究报道结果相似[9-11],提示PTEN在肾透明细胞癌的发生中起了一定的作用。研究结果还显示随着肾透明细胞癌临床分期以及病理分级的增加,PTEN的表达阳性率逐渐降低,提示PTEN很可能是肾透明细胞癌早期诊断和对预后进行判断的靶点。
        目前对于EZH2与PTEN 在肾透明细胞癌中表达的相关性研究较少。在本研究,我们在肾透明细胞癌中对 PTEN 和 EZH2的表达水平进行了联合检测, 并对两个基因的表达水平采用直线相关分析法进行了分析。研究结果显示 PTEN 和 EZH2在肾透明细胞癌中的表达水平呈显著性负相关关系,即随着EZH2蛋白表达水平的不断增高,PTEN的蛋白表达水平呈下降趋势,提示两者可能在肿瘤发生、发展中具有某种拮抗作用,具体机制尚不明确。
        综上所述, 本研究表明与肾透明细胞癌癌旁组织以及正常肾组织相比,EZH2和 PTEN 在肾透明细胞癌的表达水平有差异,且两者的表达与肾透明细胞癌的临床分期和病理分期密切相关。相关性分析结果显示,EZH2和 PTEN在肾透明细胞癌中的表达与具有显著相关,呈负相关关系。以上研究结果提示EZH2和 PTEN的发生发展中起着重要的作用。两者之前可能还存在拮抗作用, 但具有的作用机制还需要进一步的研究。对EZH2和 PTEN联合检测有助于对肾透明细胞癌早期诊断以及的恶性度和进展程度的判断,并为肾透明细胞癌提供了新的基因治疗靶点。

    参考文献
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